臭氧消毒機對(duì)實驗動物屏障設施熏蒸滅菌效果觀察

屏障環境的動物實驗室，在使用過(guò)程中的消毒效果直接影響動物飼養環境的微生物的有效控制。在實驗動物屏障環境設施消毒中，最常用的是用過(guò)氧乙酸氣溶膠噴霧消毒劑。雖然過(guò)氧乙酸的消毒效果可靠，但具有對(duì)人和動物刺激性強、對(duì)環境設施腐蝕性強等缺點。此外，長(cháng)期使用一種(zhǒng)消毒劑容易使微生物産生耐受性，因此，需要尋找安全有效的替代消毒劑和消毒方法進(jìn)行替換 。臭氧（O3）具有廣譜、高效的殺菌功效。在常溫常壓下，臭氧的穩定性極差，可自行分解爲氧氣，對(duì)環境、人員造成(chéng)的影響小。此次試驗使用日本産 HZ-100型臭氧滅菌機對(duì)密閉房間進(jìn)行熏蒸消毒，以觀察其滅菌效果。

1 方法

1.1 試驗器材

HZ-100 型臭氧熏蒸滅菌機及配套用具（日本進(jìn)口）；落下菌檢測培養皿（直徑 90mm 平皿，營養瓊脂培養基）；BI 檢 測 試 紙（ 枯 草 杆 菌，5.0×105 ～ 5.0×106CFU/ 條）； 純 水；清潔工具（掃帚、雨刮等）；酒精噴壺；塑料膜；膠帶；直徑 5 cm 塑料管道(dào)等。

1.2 滅菌前房間密閉及清洗

1）消毒房間選擇 3.1 m×3 m×2.8 m，約 26 m3，頂部送風四周排風，房間位于潔淨度 7 級但未消毒的屏障系統。

2）關閉空調送風，用塑料膜和膠帶封閉房間的送、排風口，電源、開(kāi)關、燈具等，封閉前用酒精噴霧清潔四周，使膠帶粘貼更牢，達到密閉效果。

3）使用清潔工具對(duì)天花闆、牆壁、地闆進(jìn)行清洗，目的在于去除表面(miàn)殘留的油脂和蛋白。

1.3 菌落檢查

1）熏蒸開(kāi)始前，將(jiāng)落下菌檢測培養皿按每5 m2 ～ 10 m2 設置 1 個測定點 [2]，共放置 2 個均勻放于地面(miàn)，暴露 30 min 後(hòu)，加蓋，由外向(xiàng)内回收，從屏障室傳出，放入 37 ℃恒溫培養箱中，培養 48 h 後(hòu)計數。

2）用 2 隻滅菌拭子擦塗牆壁，接種(zhǒng)在培養皿中，從屏障室内傳出，放入 37 ℃恒溫培養箱中，培養 48 h 後(hòu)計數。

3）將(jiāng) BI 試紙在桌面(miàn)和地面(miàn)上各放置 1 片。

1.4 熏蒸

1）熏蒸開(kāi)始時間設定在 17:00，開(kāi)機前，向(xiàng)室内機内加入約 5 L 純淨水，供室内加濕用。

2）檢查臭氧發(fā)生設備連接完好(hǎo)。

3）啓動臭氧機，點擊“事(shì)前工作确認”，設備自動确認，如顯示加濕槽水量不足時，應繼續向(xiàng)室内機加水，加滿爲止。

4）用膠帶和塑料膜將(jiāng)門縫和排氣管通過(guò)處用膠帶封嚴。

5） 設 定 熏 蒸 條 件，CT 值 爲 72000， 濕 度90%，臭氧最高濃度 200 ppm。

6）啓動臭氧檢測儀，監測門縫處洩漏出的臭氧。

7）點擊“熏蒸開(kāi)始”鍵，系統自動啓動。

8）室内臭氧濃度上升，觀察室外機顯示屏，達到設定 CT 值後(hòu)設備將(jiāng)自動分解臭氧。

1.5 菌落檢測

1）次日 8：00 熏蒸結束後(hòu)，操作人員穿滅菌服、戴口罩、鞋套（經(jīng) 121 ℃，0.1 MPa，50 min 滅菌）進(jìn)入屏障室房間，回收 BI 試紙，從屏障室内傳出，放入蛋白胨培養液中，設對(duì)照組，在 37 ℃恒溫培養箱中培養 48 h。

2）按照 1.3 節設置的位置及方法放置培養皿，30 min 後(hòu)回收，在 37 ℃恒溫培養箱中培養 48 h 後(hòu)計數。

3）用 2 隻滅菌拭子擦塗牆壁，接種(zhǒng)在培養皿中，從屏障室内傳出，放在 37 ℃恒溫培養箱中，培養48 h 後(hòu)計數。

1.6 熏蒸處理後(hòu)的程序

熏蒸結束後(hòu)，將(jiāng)機器移出房間，拆除封閉膠帶，恢複通風。

2 結果

2.1 臭氧熏蒸監測曲線

1）對(duì)臭氧熏蒸進(jìn)行實時監測， 圖 1 爲臭氧濃度的實時變化曲線。從曲線可以看出，在 1 h 後(hòu)室内臭氧濃度達到 200 ppm，6 h 後(hòu)機器自動分解臭氧，8 h 結束前室内臭氧濃度達到零濃度，保證了使用安全。見圖 1、圖 2、圖 3。

2）臭氧熏蒸前，調節房間相對(duì)濕度；臭氧機在開(kāi)機後(hòu)對(duì)房間進(jìn)行加濕，0.5 h 後(hòu)房間相對(duì)濕度上升至 90%。房間相對(duì)濕度調節曲線見圖 2。

3）觀察臭氧濃度（C）與接觸時間（T）乘積（CT）的變化量值，他代表着消毒過(guò)程的有效性。見圖 3。

2.2 菌落檢測結果

動物房間在熏蒸消毒前後(hòu)菌落計數檢查結果見表 1。結果顯示，熏蒸後(hòu)房間内落下菌數達到 GB 14925-2010 中規定的≤ 3 CFU/ 皿。動物房間在臭氧熏蒸前、後(hòu)菌落鑒定結果見表2。

2.3 枯草杆菌試紙培養檢驗結果對(duì)照組培養液出現渾濁，試驗組 1、2 号試管内培養液清澈，表明熏蒸消毒可以殺滅枯草杆菌。

3 讨論

試驗結果表明，HZ-100 型臭氧機對(duì)房間進(jìn)行熏蒸消毒滅菌效果良好(hǎo)。臭氧是一種(zhǒng)強氧化劑和催化劑 ，屬于物理滅菌方法，氣體滅菌還(hái)具有分布均勻、無死角等特點，房間内可帶物品一起(qǐ)熏蒸消毒，研究證明臭氧熏蒸消毒可以達到與化學(xué)滅菌相同的效果 ，能(néng)夠廣泛用于實驗室、醫療手術間、動物飼養間等設施内。在常溫常壓下臭氧易分解；

熏蒸時，保持一定濃度和時間是影響消毒效果的關鍵；而且，有研究顯示，臭氧消毒過(guò)程中空氣相對(duì)濕度＞ 75%，達到 90% 時消毒效果最好(hǎo) 。本文使用臭氧機進(jìn)行試驗，先對(duì)房間内進(jìn)行加濕，當達到所設定相對(duì)濕度時開(kāi)始産生臭氧，并且，能(néng)夠有效地控制臭氧濃度維持在 200 ppm（臭氧在空氣中時 1 ppm=2 mg ·m-3），全程監測，自動生成(chéng)曲線，保證消毒過(guò)程有效。消毒過(guò)程中對(duì)人員、動物的危害也是需要注重

的問題。空氣中的臭氧濃度達到 0.01~0.02 mg·m-3時，人即可嗅到。有研究表明，動态屏障環境内臭氧濃度達到 0.32 mg·m-3 時可引起(qǐ)小鼠肺部病理變化與死胎，而濃度降到 0.21 mg·m-3 時，對(duì)肺部病變、死胎率方面(miàn)無不良影響，爲安全濃度 [6]；也有試驗顯示，大鼠在臭氧濃度爲 1.12 mg·m-3 的 IVC籠盒内飼養，連續 3 d，每天 35 min 臭氧輻照，未發(fā)現不良反應及異常肺部病例變化 [7]。該機型采用分體式設計，臭氧發(fā)生器置于被熏蒸房間内，房間内不帶動物消毒，密閉措施可使人員與臭氧隔離，起(qǐ)到安全防護的作用。通過(guò)室外機可進(jìn)行程序控制，數據讀取等操作，并配備強制停止按鍵。熏蒸進(jìn)程結束，室内機自行分解臭氧，達到安全濃度值，房間随即可以進(jìn)入使用，全程自動化，操作安全、簡便。